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尊龙凯时:破骨细胞体外诱导实验攻略

发布时间:2025-08-01   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时能否影响细胞的核个数呢?并非所有细胞只有一个细胞核哦。例如,破骨细胞是一种高度分化的多核细胞,具有特殊的功能,但它们没有克隆能力,无法进行传代培养,且在体外培养上也较为棘手。

尊龙凯时:破骨细胞体外诱导实验攻略

骨代谢的背景知识

让我们先了解一下与骨代谢相关的专业术语!

骨重塑

骨重塑是指破骨细胞清除旧骨和受损骨质的过程,并由成骨细胞形成的新骨替代。这一过程依赖于破骨细胞和成骨细胞之间的“交流”来进行调控。

破骨细胞

破骨细胞(osteoclasts,OCs)是一种源自造血干细胞的骨吸收细胞,通过分泌酸性酶和蛋白水解酶来降解骨质。它们在骨稳态的维持和健康中至关重要。

成骨细胞

成骨细胞(Osteoblasts,OBs)是负责骨形成的细胞,它们由间充质前体细胞在特定转录因作用下分化为骨祖细胞并最终形成成熟的成骨细胞。

骨矿化

骨矿化指的是钙和磷等无机盐沉淀在骨组织中的过程。作为一种特殊的结缔组织,骨骼具有高度矿化的结构,提供身体结构支撑,保护重要器官,并为骨髓造血提供场所。此外,骨骼还是无机离子的主要储存基地。

骨吸收

骨吸收是指骨钙的释放过程,即将钙从骨骼中“搬出去”。破骨细胞通过分解硬骨组织,将矿物质和钙释放到血液中。

破骨细胞的体外诱导实验

实验步骤

  1. 使用含10% FBS的α-MEM培养基将RAW2647细胞制成细胞悬液,以3×104 cells/孔的密度接种于24孔板中。
  2. 细胞接种后12小时,加入RANKL(20-100 ng/mL)。每三天更换培养基,并补加RANKL。
  3. 在4天后开始出现明显的多核破骨细胞,并在第5至第6天逐渐增多。

由于RAW2647细胞表达M-CSF及其受体c-fms,因此仅需加入RANKL即可诱导破骨细胞分化。

如何鉴定破骨细胞?

形态学鉴定

通过显微镜观察可见成熟破骨细胞具有多个细胞核,通常含有10至20个核。同时,活化破骨细胞的边缘呈现“皱褶缘”,这是其骨吸收功能的区域。

功能标志物检测

  • Trap染色:破骨细胞特有的抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap),常用于鉴别破骨细胞。
  • 骨吸收实验:观察骨髓单核细胞(BMMs)接种于骨片后形成的吸收陷窝,利用扫描电子显微镜进行成像分析。

分子标志物检测

通过qPCR和WB技术检测Trap、NFATc1、细胞融合相关蛋白等分子标志物,以确认破骨细胞的分化和功能。

在此过程中,借助尊龙凯时提供的相关产品,可以有效提升实验的准确性和结果。我们期待通过深入的研究,发现更多关于骨代谢的奥秘,推动生物医学领域的进步。