### 通用ELISA抗体检测操作流程（效价测定）

#### 1. 包被步骤：

1）用包被缓冲液制备1-10μg/ml的抗原溶液（需现配现用）。

2）向高结合力ELISA板（货号80112）每孔加入100μl抗原溶液，覆盖封板膜，在室温下轻摇孵育2-6小时或于4℃过夜。

3）吸弃溶液后，用洗涤缓冲液洗板2次。

#### 2. 封闭步骤：

1）用封闭缓冲液母液配置工作液，每孔加入300μl，室温下轻摇孵育2-6小时或在4℃下过夜。

2）吸弃封闭液后，用吸水纸拍干，板子可立即使用或密封保存于4℃用于后续实验。

#### 3. 抗体效价检测：

1）用抗体稀释液对免疫前/免疫后血清进行梯度稀释（1:100至1:100,000），每孔添加100μl。覆盖封板膜后，在室温下轻摇孵育30分钟。

2）吸弃液体，用洗涤缓冲液洗板5次（每次200-300μl，洗涤不充分可能导致高背景）。

3）用抗体稀释液配置HRP标记的抗兔二抗（1:5,000-1:20,000），每孔加入100μl（稀释不当会影响显色效果）。

4）覆盖封板膜，在室温下轻摇孵育30分钟。

5）吸弃液体，再洗板5次后拍干。

6）每孔加入100μl现成的TMB底物溶液。

7）覆盖封板膜，在室温下轻摇孵育至阳性孔出现蓝色（最长不超过15分钟）。

8）每孔加入100μl终止液，颜色由蓝色转为黄色。

9）在450nm波长下读取吸光度。

#### 注意事项：

1）本ELISA流程适用于针对纯化抗原（如蛋白质或多肽）产生的抗体进行定性检测，不适合用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。

2）本流程默认一抗来源于兔，若使用其他宿主动物需选用相应的二抗。

#### 相关产品推荐：

可通过尊龙凯时获取以下抗体检测试剂盒：

• 4ADI80150 小鼠血清抗体检测试剂盒
• 4ADI80155 大鼠血清抗体检测试剂盒
• 4ADI80160 兔血清抗体检测试剂盒
• 4ADI80165 山羊血清抗体检测试剂盒
• 4ADI80166 绵羊血清抗体检测试剂盒
• 4ADI80170 人血清抗体检测试剂盒

如需了解更多产品信息，请咨询尊龙凯时的中国区总代理北京博蕾德生物科技有限公司。