随着生物医学领域的迅猛发展，深入理解和精准测量免疫系统功能的重要性愈发凸显。酶联免疫斑点技术（ELISpot）作为一项高效的科技手段，在这一进程中发挥了至关重要的作用。借助ELISpot，研究人员可以准确定量分析单一免疫细胞所分泌的细胞因子或其他分子，为免疫应答的研究开辟了新思路。尊龙凯时本期将带您走进ELISpot的世界，揭示免疫反应背后的奥秘。

ELISpot技术简介

酶联免疫斑点技术（Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay，ELISpot）是一种基于ELISA原理的创新细胞检测技术。ELISpot的历史可以追溯到1978年，当时牛津大学的Don Mason教授开发了一种用于检测抗体分泌细胞的“胶片上的斑点技术”。之后，1983年，科学家JD Sedgwick和C Czerkinsky独立发展了ELISpot技术，提出了酶联免疫的概念并将其应用于斑点形成技术，使得该技术更加实用且灵敏度显著提高。ELISpot能够检测单个细胞分泌的细胞因子或抗体，对样本中活细胞的免疫状态进行动态监测和评估。

在ELISpot的过程中，细胞会被培养在包被了特异性捕获抗体的PVDF板中，细胞分泌的靶标蛋白将被特异性抗体捕获。经过适当的孵育时间后，去除细胞并加入生物素化抗体，随后通过酶促显色反应形成沉淀物，即“斑点”。ELISpot具备高灵敏度、高通量筛选、活细胞功能评价和操作简便等优点，因此被广泛应用于疫苗研究、药物筛选、感染性疾病诊断与研究、肿瘤免疫研究、自身免疫病研究、过敏研究以及移植排斥反应的预测等多种免疫相关研究中。

ELISpot技术的进阶版——FluoroSpot

FluoroSpot是在ELISpot基础上发展的新技术，它采用荧光检测取代了比色法。通过将不同波长的荧光团混合在一起，利用滤光片可以实现多种细胞因子的精确检测。FluoroSpot技术保留了ELISpot的高灵敏度优势，并能够同时分析分泌不同细胞因子的多个细胞群体。例如，在三色FluoroSpot实验中，96孔板的PVDF膜上可同时包被IFN-γ、IL-17A和IL-22因子的捕获抗体，采用不同发射波长的荧光素标记，从而生成不同颜色的荧光斑点，实现对三种因子的斑点计数和数据分析。

ELISpot与ELISA的比较

从技术本质上来看，ELISpot和ELISA均基于双抗夹心法原理，但二者的应用目的不同。ELISA主要用于定量检测样本溶液中靶标蛋白的浓度，而ELISpot则用于动态检测评估样本中活细胞的免疫状态。以下是两者的详细对比：

综上所述，ELISpot的独特优势使其在疫苗开发、肿瘤免疫治疗等多个领域展现出巨大的潜力。随着科学技术的不断进步，尊龙凯时相信ELISpot将在促进人类健康事业方面发挥更大的作用。更多关于ELISA的相关知识，请持续关注尊龙凯时。